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細(xì)胞因子檢測的常見免疫學(xué)技術(shù)有哪些?

 更新時間:2023-12-23 點(diǎn)擊量:546
  細(xì)胞因子,是一類由免疫細(xì)胞和某些非免疫細(xì)胞(內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等)在受到刺激后合成和分泌的小分子蛋白質(zhì),具有廣泛的生物學(xué)活性,通過結(jié)合相應(yīng)受體,調(diào)控細(xì)胞生長、分化、凋亡、傷口愈合、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和穩(wěn)態(tài)平衡。研究細(xì)胞因子為臨床上疾病的預(yù)防、診斷、機(jī)理研究以及治療奠定了堅實(shí)基礎(chǔ),其應(yīng)用前景廣泛。那么你知道細(xì)胞因子檢測的常見免疫學(xué)技術(shù)有什么嗎?讓我們一起來看看吧!
  一、傳統(tǒng)Western Blot
  傳統(tǒng)蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blot,WB)是一種常見的蛋白質(zhì)免疫分析技術(shù),被應(yīng)用于確認(rèn)特定蛋白質(zhì)的存在并進(jìn)行定性和半定量分析。WB實(shí)驗基于抗原抗體特異性反應(yīng),經(jīng)過SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)后,將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素薄膜(NC)或聚偏二氟乙烯膜(PVDF)。隨后,使用脫脂牛奶封閉液進(jìn)行封閉,一抗稀釋液進(jìn)行孵育。蛋白質(zhì)與抗體結(jié)合后,通過洗滌去除未結(jié)合的一抗,接著加入酶標(biāo)記或者熒光標(biāo)記的二抗。最后,利用化學(xué)發(fā)光液或者特定的激發(fā)光源,對靶蛋白進(jìn)行檢測,可以通過膠片、化學(xué)發(fā)光儀或熒光成像儀進(jìn)行成像,最終捕捉到蛋白條帶。
  二、全自動毛細(xì)管Digital Western
  作為創(chuàng)新性毛細(xì)管電泳免疫學(xué)技術(shù),全自動毛細(xì)管Digital Western(也稱Simple Western)將Western Blot技術(shù)和ELISA技術(shù)合二為一,具備傳統(tǒng)WB蛋白質(zhì)可視化定性優(yōu)勢,同時具備ELISA免疫學(xué)實(shí)驗精準(zhǔn)定量能力,其靈敏度和精密度符合高標(biāo)準(zhǔn)生物分析要求,可利用超微量樣本實(shí)現(xiàn)內(nèi)源性蛋白質(zhì)精準(zhǔn)定量。自動化規(guī)避了傳統(tǒng)WB和SDS-PAGE勞動密集型操作引入的人為誤差。僅需要微量樣本(3μL)即可實(shí)現(xiàn)多重蛋白質(zhì)表達(dá)檢測,節(jié)約珍貴樣品,
  三、傳統(tǒng)ELISA
  酶聯(lián)免疫吸附測定法是一種常用的免疫測定方法,通常用于定量檢測樣本中目的蛋白的水平。利用ELISA檢測的樣本包括血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、細(xì)胞裂解物、唾液、組織裂解物和尿液。ELISA通常在96孔板中進(jìn)行,孔板中包被有一種捕獲特定分析物的抗體。在與實(shí)驗樣本、標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌贩跤螅繕?biāo)分析物將被這種抗體捕獲。隨后使用結(jié)合到目標(biāo)分析物不同抗原表位的檢測抗體完成"夾心"結(jié)構(gòu)。接著加入底物溶液,產(chǎn)生的信號與結(jié)合的分析物量成比例。ELISA有不同形式,包括直接法ELISA、間接法ELISA、夾心法ELISA和競爭法ELISA。
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